DNA测序原理 基因测序一代二代三代

桑格测序是酶促测序。Illumina/Solex基因组分析仪测序的基本原理是边合成边测序，高通量测序技术及原理:什么是高通量测序高通量测序技术？也叫第二代测序，桑格双脱氧链终止法测序程序是根据DNA复制和RNA逆转录的原理设计的。

一般的流程是先将DNA切割成短序列模板，然后将这些短序列固定在待成像的芯片上。每一个短序列都是一个polo，也就是说芯片占据了一个位置，PCR复制的这个序列的一批克隆就固定在这个位置上。然后就像传统的方法，成对生长，每生长一个核苷酸，就成像一次。在图像上，有无数个点，每个点对应一个polony。后来经过分析，是这个polony对应序列的核酸(其实具体技术还是有很大差别的，所以说的太粗糙了)。

Sanger的方法目前仍被广泛使用。下一代基因测序主要用于重测已知序列或测序更短的序列。下一代测序的三个主要平台是454、Illumina和SOLiD。具体技术搜索百度就知道了，虽然现在第三代测序已经出来上线了，但是还需要时间考虑。DNA测序(或翻译DNA测序)是指分析特定DNA片段的碱基序列，即腺嘌呤(a)、胸腺嘧啶(t)、胞嘧啶(c)和鸟嘌呤(g)的排列。

目前应用最广泛的是FrederickSanger发明的双脱氧链终止法。新的测序方法，如454生物科学法和焦磷酸测序法。桑格测序法桑格双脱氧链终止法是FrederickSanger在1975年发明的。测序过程需要聚合酶链式反应(PCR)。

将四段相同的DNA放入四个相同的试管中，四个(1，2，3，4)试管的原料分别是dATP，dGTP，dCTP，dTTP，ddATP；dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddGTPdATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddCTPdATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddTTP .这样，a，g，c，

然后电泳，根据每个片段的长度，读出序列。桑格测序是酶促测序。桑格双脱氧链终止法(酶法)测序程序是根据DNA复制和RNA逆转录的原理设计的。1.分离待检测的核酸模板，可以是DNA、RNA、双链或单链。2.加入合适的引物、模板和四个dNTP(包括放射性标记的dATP，如？

第二代DNA测序技术:通过捕捉新合成末端的标签来确定DNA序列。Illumina/Solex基因组分析仪测序的基本原理是边合成边测序。在桑格测序法的基础上，通过技术创新，用不同颜色的荧光标记四种不同的dNTP。当DNA聚合酶合成互补链时，每个dNTP会释放不同的荧光。根据捕获的荧光信号，通过专门的计算机软件处理，获得待测DNA的序列信息。

什么是高通量测序高通量测序技术？也叫第二代NextGenerationSequencing，NGS)，是相对于第一代测序而言的。同时，由于高通量测序的出现，使我们能够全面细致地分析一个物种的基因组和转录组，因此也被称为深度测序。

与第一代测序桑格法相比，高通量测序技术在处理大规模样本方面优势明显，在测序速度和测序通量方面具有不可替代的地位。它是目前基因组学研究中的核心技术。测序原理:将基因组DNA片段化，然后克隆入质粒载体，再转化大肠杆菌。对于每个测序反应，选择单克隆抗体并纯化质粒DNA。每个循环测序反应包含所有四种用于扩增的脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)和有限量的不同的双脱氧核苷酸三磷酸(ddNTP)用于终止。

高通量测序的原理是将基因组DNA片段化，然后克隆到质粒载体中，再转化到大肠杆菌中。对于每个测序反应，选择单克隆抗体并纯化质粒DNA。高通量是相对于第一代测序而言的。第一代测序一次只能测定一个样本的一个片段，产生的数据量比较小，而高通量测序一次产生的数据量可以是几十克或者几百克，一次可以测定很多个样本。高通量测序技术的诞生可以说是基因组学研究领域的一个里程碑。

高通量基因测序检测俗称无创DNA，即取孕妇静脉血，检查胎儿染色体。目前，接受这项检查的孕妇人数正在逐渐增加。无创DNA检查有一定的适应症，符合适应症的孕妇需要遵医嘱进行检查。与血清学产前筛查相比，高通量基因测序产前筛查价格更贵，约1900元，筛查率和准确率更高，21三体筛查准确率一般可达95%。

Nextgenerationsequencing(NGS)，又称Highthroughputsequencing，是一种基于PCR和基因芯片的DNA测序技术。我们都知道第一代测序是通过合成终止测序，而第二代测序则创造性的引入了可逆终止端，从而实现了边合成边测序。

ABI公司在双脱氧测序的基础上进一步开发了荧光标记双脱氧测序试剂盒(BigDye试剂)。然后结合毛细管电泳，产生了“ABI3730”和“ABI3500”测序仪，原理:双脱氧测序的第一个核心技术是在DNA聚合酶合成DNA链的过程中加入双脱氧核苷酸(ddNTP)。天然DNA的成分是单脱氧核苷酸(dNTP)，其糖基的3’和5’位置分别有一个羟基，5’位置的羟基连接在上游的磷酸基团上，不断重复形成DNA骨架链。

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